二十六 、双向凝胶电泳（2-DE）
双向凝胶电泳的原理是第一向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离 ，第二向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离 ，把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开。
二十七 、mRNA的分离与纯化（寡聚(dT)纤维素柱纯化mRNA）
真核细胞的mRNA分子显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。这种结构为真核mRNA的提取 ，提供了极为方便的选择性标志 ，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）琼脂糖亲合层析分离纯化mRNA的理论基础就在于此 。
mRNA的分离方法较多 ，其中以寡聚（dT）-纤维素柱层析法为有效 ，已成为常规方法 。此法利用mRNA
3’末端含有Poly（A+）的特点，在RNA流经寡聚（dT）纤维素柱时 ，在高盐缓冲液的作用下 ，mRNA被特异地结合在柱上 ，当逐渐降低盐的浓度时或在低盐溶液和蒸馏水的情况下 ，mRNA被洗脱 ，经过两次寡聚（dT）纤维柱后，即可得到较高纯度的mRNA。
二十八、His-tag纯化蛋白
His•Tag序列（6 、8或10个连续的组氨酸残基）与固定在基于NTA(氮川三乙酸镍)
-和IDA-
的His•Bind树脂上的二价阳离子Ni2+结合 。洗去未结合蛋白后 ，用咪唑或稍低的pH洗脱并回收目标蛋白 。该通用系统使得可在温和、非变性条件 ，或存在6M胍或尿素条件下纯化蛋白。
 |
服务热线 ：400-996-1889 
资讯中心